“十三五”时期农产品质量安全营养健康优质化领域科研技术创新亮点成果展播——微囊藻毒素新型抗体制备及快速检测产品研发
日期：2022-06-08 作者： 来源：农安科普
微囊藻毒素新型抗体制备及快速检测产品研发
微囊藻毒素（microcystins，MCs）是富营养化的淡水水体中常见的藻类毒素。目前报道的微囊藻毒素已有279种（其中以MC-LR已知毒性最强，急性危害最大）。除了通过饮用水进入人体外，MCs还可积累在水生有机体中，据报道，鱼、软体动物和浮游生物都能积累大量毒素，通过食物链进入人体。目前现行的MCs国标检测方法以液相色谱法为主，虽然方法具有较高的选择性，但也存在样品取样量较大、前处理方法复杂等问题。针对上述问题，江苏省农业科学院开展了MC新型抗体制备及免疫快速检测产品研制工作。
成果主要亮点
1.微囊藻毒素广谱识别单克隆抗体的制备及专利保藏。采用碳化二亚胺法将MC-LR与载体蛋白偶联作为免疫原及包被抗原，采用杂交瘤融合法筛选获得1株稳定分泌MCs广谱识别单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该细胞株已在中国典型培养物保藏中心进行专利保藏。以该单克隆抗体为识别分子，建立ELISA检测方法，对MC-LR最低检测限为0.22 ng/mL，线性检测范围为0.95～15.34ng/mL，并对MC-RR、MC-YR具有广谱识别能力。
2.微囊藻毒素单链抗体构建及抗原表位预测。以CCTCC No.C2019杂交瘤细胞株为模板，构建鼠源MC单链抗体，并通过同源建模与分子对接，预测了MC-LR5号Adda氨基酸的羰基及苯环结构、4号精氨酸的胍基为关键抗原表位，并首次展示了MC-LR与其单链抗体的结合模式。
3.高亲和力微囊藻毒素纳米抗体筛选与检测方法建立。分别采用MC-LR与钥孔血蓝蛋白和牛血清白蛋白为筛选抗原，从驼源天然噬菌体纳米抗体库中获得3株MC-LR识别抗体，并在 Escherichia. coli BL21中进行可溶性表达。以纳米抗体建立的IC-ELISA法对MC-LR最低检出限达到0.06μg/L。
4.检测产品的应用。目前本研究建立的MC免疫检测方法及试剂盒产品已在饮用水、水产品及藻类肥料样品中MC快速筛查检测中得到了应用。
本研究获得专利保藏杂交瘤细胞株1株，完成3种基于单抗、单链抗体及纳米抗体的微囊藻毒素检测方法，并研发了相应的ELISA检测试剂盒产品，获得MC抗原表位分析数据。发表研究论文5篇（SCI收录4篇），申请发明专利1件。
主要完成单位
江苏省农业科学院
主要完成人员
刘媛、徐重新、林曼曼、刘姝、张霄、胡晓丹、仲建锋、卢莉娜、高美静、朱庆、陈蔚、谢雅晶、王玉龙、张存政、刘贤金